細胞生物學實驗的日常，都是跟細胞培養(yǎng)、凍存和復蘇這些基本的操作密不可分的。在細胞凍存和復蘇領(lǐng)域一直奉行著一條黃金法則，那就是“慢凍快融”！ 實驗證明這樣可以最大限度的保存細胞活力。

 慢凍

細胞是很脆弱的，尤其是哺乳動物細胞，只有一層薄薄的細胞膜，沒有堅固的細胞壁保護，在進入凍存狀態(tài)前，緩慢的降溫過程有助于保存細胞的活力。目前細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜（DMSO）作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。

快融

 細胞復蘇，是指將凍存在液氮或者-70℃冰箱中的細胞解凍之后重新培養(yǎng)，細胞恢復生長的過程。復蘇細胞應采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成的損傷。

 最常見的復蘇工具

水作為一種使用廣泛的導熱介質(zhì)，具有良好的導熱性，可以保證快速加熱，同時也可防止凍存管內(nèi)部的局部過熱。水浴是細胞培養(yǎng)實驗室的標準配置之一，在進行細胞復蘇實驗時，無需額外的輔助設(shè)備或試劑。然，水浴經(jīng)常是作為實驗室共享的設(shè)備，若無專人值守，則水浴槽內(nèi)的水不會定期進行更換，就會攜帶污染，會間接導致復蘇細胞的污染風險。復蘇過程，常伴隨著對凍存管的晃動（晃動可以防止管內(nèi)樣品產(chǎn)生溫度差異），管蓋處也有滲入水的可能。